El Vediense charló con la Dra. Bárbara Leale, bioquímica de nuestro medio que trabaja en la primera línea contra la pandemia del covid 19, tanto desde su laboratorio privado como en el sistema de salud pública, y que además es la principal referente de los hisopados que se realizan en Vedia.

En esta oportunidad nos realizó una actualización de los métodos diagnósticos que contamos para detectar el virus y/o los anticuerpos que produce nuestro sistema inmune ante la infección.

Bárbara, cuáles con los principales tipos de tomas de muestras?

Hay diferentes muestras sobre las que se puede determinar la presencia del virus.

Hisopado orofaringeo (hisopado de garganta) y nasofaríngeo (hisopado nasal) es la muestra que se usa para la detección del virus para PCR. Siendo esta la muestra más adecuada, ya que llega hasta el lugar de entrada y alojamiento del virus.

También está la muestra salival, este tipo de muestra no es tan especifica como la anterior, ya que se necesitan “arrastrar” células de la pared de la faringe mediante una gárgara generada con solución fisiológica. El problema que acarrea esto es que no es representativa, ya que no depende del profesional la toma de muestra, acumulando un mayor porcentaje de error.

Otra es la muestra sanguínea, esta muestra se utiliza generalmente para la detección de anticuerpos.  Tanto en test rápidos como en técnicas más sensibles en equipos especializados para tal fin.

Con respecto a las técnicas utilizadas para la detección del virus SARS-CoV-2 (COVID-19) cuáles tenemos?

En primer lugar tenemos el Hisopado oronasofaríngeo PCR.  La técnica que se utiliza en este caso es lo que se conoce como Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), voy a tratar de explicarlo lo más simple posible así se entiende. Esta técnica, utiliza el ARN viral (componente genético, lo que permite identificar al virus como si fuera su DNI), similar a nuestro  ADN,  la cual solo se puede observar mediante microscopios de alta resolución. El ARN del virus junto con  el agregado de varios compuestos más un fluorocromo (similar a una luz fluorescente) se colocan en un termociclador que mediante oscilaciones térmicas permiten tener un compuesto que emite fluorescencia, similar a cuando realizamos una torta; componentes exactamente medidos y bien determinados en una batidora.

La técnica propiamente dicha agranda y multiplica esa pequeñísima porción de ARN, junto con el fluorocromo, el cual va a emitir una fluorescencia que va a ser proporcional a la cantidad de virus presente. En este tipo de análisis los resultados, demoran alrededor de 24 a 36 hs. por el tiempo y el tipo de proceso que lleva. Teniendo  una sensibilidad del 96 %. Este estudio es costoso porque utiliza termocicladores  que permiten amplias variaciones de temperaturas para poder llevar a cabo el estudio.

Otra muestra que se usa para la detección de virus con PCR, es mediante la saliva. A pesar de que la técnica es la mejor dentro de las usadas, en este caso, la muestra; como explique anteriormente no siempre suele ser representativa (efectiva) y acarrea un error mayor, generando falsos negativos.

También están los test rápidos. Este tipo de testeos nos permiten tener resultados en pocos minutos (aprox 30 min).  La técnica en este caso usualmente es la cromatografica, similar a la que se utiliza en los test de embarazo. Siendo esta igual en su sensibilidad que los últimos mencionados. Los resultados Detectable no tienen discusión, pero este tipo de tets puede arrojar falsos  No Detectables  (Negativos), las causas de esto pueden ser: tiempo insuficiente de incubación de virus (mínimo 3 días, al igual que la PCR) y la técnica utilizada que tiene un 92 % de sensibilidad. Al no requerir grandes equipamientos  esta determinación es menos costosa

Otro tipo de detección es la de amplificación térmica mediada por BUCLE, técnica desarrollada en nuestro país. Permite obtener un resultado rápido (aprox 2 hs) y con bajo costo.  Esta técnica no necesita de termociclador (usada en PCR) y solo trabaja a una determinada temperatura  (64°C).  Es sensible ya que disminuye la posibilidad de falsos negativos y específica similar a la PCR lo que reduce los resultados falsos positivos.

Que sucede con los resultados dudosos o que se encuentran en la línea de CAT OFF?

Primero vamos a explicar que toda aquella fluorescencia que nombramos anteriormente, tiene diferente intensidad en base a la concentración de virus presente en la muestra, esto se lleva a un grafico de coordenadas donde hay una línea que representa un determinado valor, a esto se le llama CAT OFF.  En este grafico tendremos puntos que van a caer por encima de esta línea (detectable- COVID 19 POSITIVO), por debajo de esta línea (No detectable- COVID 19 NEGATIVO) y  algunos puntos, los menos, cercanos o sobre esta línea (DUDOSO). Este último se debe a varios motivos, cuya causa puede ser: baja concentración de virus, reacción incompleta, algún interferente en el desarrollo de la técnica, etc. Por eso frente a estos casos se solicita nueva muestra, luego de transcurridos  varios días.

En relación a los anticuerpos, hay que saber dos cosas primero. Los anticuerpos son generados como medio de defensa de nuestro organismo por la presencia de un agente extraño, en este caso sería el virus SARS-COV 2.  Vamos a hablar básicamente de los Ac Ig G e Ig M.

Los primeros Ig G son los anticuerpos que se generan luego de haber transitado la enfermedad, estos son los tan famosos que permiten una inmunidad de entre 4 a 6 meses. Y los Ig M, son los que se los llaman agudos, son los anticuerpos que se encuentran presentes durante la convalecencia de la enfermedad.

Para la detección de estos tenemos dos técnicas también, tanto los test rápidos como la utilización de equipos. Acá sucede que lo mismo que lo que se conocen como técnicas directas (PCR y test rápido de Antígenos), llamadas así porque se detecta el virus mismo. Siendo las más sensibles las que se realizan en los equipos y las menos sensibles y menos especificas las técnicas rápidas.

El fin de la detección cuantitativa de los anticuerpos, principalmente los de tipo Ig G, es cuantificar la cantidad de anticuerpos para la donación de plasma, a parte del conocimiento particular de cada paciente que quiere saber si generó defensas para el COVID. Y con respecto a los test rápidos que proporcionan detección de Ig G e Ig M, son mucho más útiles para el testeo de un sector poblacional, o para  la evaluación puntual  de un determinado grupo, siendo inespecíficos y poco sensibles para el diagnostico puntual del COVID 19. El tipo de muestra en este caso, solo sanguínea.

Resumen, la mejor determinación que conocemos es el hisopado oronasofaríngeo PCR por su alta sensibilidad y especificidad, junto con la amplificación térmica medida por BUCLE. Le seguiría el hisopado nasal test rápido (por la toma de muestra) y el salival PCR (por el tipo de muestra). Haciendo la salvedad de que no contamos con una detección que sea 100 % sensible y especifica.

Como conclusión, desde el área de salud, tanto pública como privada, les pedimos que por favor se sigan cuidando, aun nos falta mucho. Nuestra tarea es ardua y dejamos muchas horas diarias de trabajo para poder atravesar de la mejor manera esta pandemia. Así que a nombre de todos, cumplan con el uso de barbijo, el distanciamiento social y el lavado de manos y/o uso de alcohol.